AAV基因治疗药物质量控制策略

基因治疗制品的质量控制策略，应是从早期候选药物筛选阶段到上市后的持续监控的药品整个全生命周期的管理。并基于质量源于设计（QbD）的理念下，从生产工艺开发、生产原辅料选择和检定、生产工艺中间控制、工艺的性能确认和验证、原液成品放行检测、以及产品的表征研究和稳定性研究等方面控制质量风险，确保制品的安全性、有效性和质量可控性。

一．分析方法和质量标准

在AAV药物研发的不同阶段，所要关注的质量重点是不同的，相对应的方法学和方法验证，以及法规要求也是不同。

● 在早期的临床前候选化合物（PCC，preclinical candidate compounds）发现阶段，更加关注对于高通量筛选的需求，以及对于分子的可开发性的评估。涉及到的分析方法包括体外和体内的转导活性，定量和纯度的分析，PK、组织分布以及TK的研究，这阶段不需要进行方法学的验证。法规上要求是要保证数据的完整性。

● IND申请时，需建立初步质量标准，分析方法需要确认及部分验证。产品的质量属性需满足临床研究。涉及的分析方法包括：理化、结构、杂质、纯度、活性、安全性等，以及临床前生物分析方法。法规上除了数据完整性要求外，还要符合GLP和GMP要求。

● 临床研究后期，需基于临床批次的质量研究，建立整体的质量控制和中间控制的策略。涉及方法包括：原辅料、中间品、原液及成品放行方法，以及临床生物分析方法。BLA申报时分析方法需要进行全套严格的验证。除了遵循当地药典、GMP、GCP相关的法规之外，质量标准和检定规程还需获得监管部门的批准。

● 上市后，涉及到产品的放行，质量趋势分析和回顾。涉及的分析方法涵盖原辅料的分析、中间品，原液和成品的放行方法。可能会出现分析方法和质量标准的升版，那相应的分析方法需要再验证或者重新验证。法规上要符合GMP和药典的要求。

对于AAV质量控制的分析方法，从所用分析方法的范围和它的特性，来选择不同的分析方法，同时结合分析方法灵敏度、通量、成本、当前研发阶段，来进行多维度的评估，选择合适的方法。

二．质量控制系统

和上文提到的分析方法和质量标准相似，质量控制系统也是贯穿了整个生产流程。在QbD的理念下，产品质量不是检测出来的，而是通过合理的设计、产品的深度理解，以及结合严格验证的生产和环境条件等多种控制手段来实现的。所以质量控制系统涵盖了从原料、生产涉及的所有要素及每步工艺及最终产品，分别通过一序列测试项目和验收标准逐步给予确认，证明目标产品生产所有过程符合预定工艺及要求，从而确保最终放行到市场上的产品质量、安全和疗效可控。质量控制系统同时可以预防风险发生，一旦出现问题可以及时终止生产，降低风险发生的概率和严重性。质量控制系统和质量保证系统一起为产品质量保驾护航。

对于AAV产品放行的质量标准一般涉及到三个方面，一是原材料的标准，二是病毒原液的放行标准，三是病毒成品的放行标准。

原材料质粒质量放行需要重点关注超螺旋纯度，因为是稳定性敏感的一个指标。

质粒的放行质量标准举例，见下表1。

表1 质粒的放行质量标准举例

*可接受标准仅是举例，具体情况还要根据不同产品设定。

原液和成品放行检测项目有重叠，原液除了要重点关注分子相关的特性之外，比如含量和生物活性，还需要重点关注的是HCD杂质分析，因为在后面的DP中不再做这些杂质的检测和研究。成品放行中需要重点关注含量和生物活性，尤其是生物活性，因为该指标是稳定性中比较敏感的指标之一。rAAV原液的放行质量标准举例，见下表2。

表2 rAAV原液的放行质量标准举例

*可接受标准仅是举例，具体情况还要根据不同产品设定。

**中美指导原则中都建议控制宿主DNA残留量小于10ng/dose，但是对于全身给药的AAV产品，需要剂量比较大很难达到，监管机构目前不是强制需要满足这个要求，但是要产品开发过程中监控宿主DNA残留，并持续改进工艺减少宿主DNA残留。

成品的放行质量标准举例，见下表3。

表3 成品的放行质量标准

*可接受标准仅是举例，具体情况还要根据不同产品设定。   

三．总结

● 考虑到rAAV药物制备的特殊性，其原料药质量控制和安全控制尤为重要，建议药品全生命周期中持续跟进最新的分析技术，进行检测方法的改进，从而进一步提升质量控制水准；

● 质量标准制定需要综合考虑法规要求、工艺及产品理解、历史数据、临床前和临床安全数据科学、合理制定，是连接产品、工艺与临床经验的纽带;

● 应基于QbD的质量控制策略确保产品质量、安全、有效及批间一致性。

参考文献：

1.  Quality Control Testing, Characterization and Critical Quality Attributes of Adeno-Associated Virus Vectors Used for Human Gene Therapy DOI: 10.1002/biot.202000022.

2.  基因治疗制品质量控制，中国药事

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