1 附件 7 体外皮肤变态反应 ARE-Nrf2 荧光素酶 LuSens 试验 方法 （征求意见稿） The ARE-Nrf2 Luciferase LuSens Test 1 范围 本方法规定了体外皮肤变态反应 ARE-Nrf2 荧光素酶 LuSens 试验的基本原则、要求和 方法。 本方法适用于化妆品用化学原料潜在致敏性的评价。 2 试验目的 本试验用于检测体外培养的 LuSens 细胞荧光素酶的表达变化，以评价受试物引起皮肤 变态反应的可能性。 3 定义 3.1 75% 细胞存活率浓度值 75% Cell viability （ CV75 ） 受试物染毒后，细胞存活率为 75% 时对应的受试物浓度值。 3.2 抗氧化反应元件 Antioxidant response element （ ARE ） 指 存在于 细胞保护基因的启动子 区域 ，能够响应氧化应激并调控相关基因表达的作用 元 件。 3.3 荧光素酶活性诱导倍数 Fold luciferase activity induction （ Fold induction ） 扣除空白对照后，受试物和溶剂对照的细胞发光比值。 4 试验的基本原则 当致敏物质接触皮肤后 ，角质形成细胞被激活 ，诱导炎症反应及特定细胞信号通路相关 基因的表达 。体外培养含有荧光素酶报告基因的人角质形成细胞系 （ LuSens 细胞 ），暴露于 受试物，通过计算细胞相对存活率和荧光素酶活性，从而预测受试物是否具有皮肤致敏性 。 5 试剂 和 材料 5.1 细胞 选用含有 ARE 荧光素酶报告基因的人角质形成细胞株（ LuSens 细胞株 ）。