附件 11 化妆品用化学原料荧光素渗漏试验方法 Fluorescein Leakage In Vitro Test Method 1 范围 本方法规定了体外荧光素渗漏试验的 要求和方法。 本方法适用于化妆品用水溶性化学原料安全性毒理学检测。 2 试验目的 预测和评价化妆品用水溶性化学原料对眼睛是否具有强刺激性或腐蚀性。 3 定义 3.1 眼睛刺激性 eye irritation 眼球表面接触受试物后所产生的可逆性炎性变化。 3.2 眼睛腐蚀性 eye corrosion 眼球表面接触受试物后引起的不可逆性组织损伤。 3.3 荧光素渗漏 fluorescein leakage （ FL ） 暴露于受试物后的 MDCK 细胞模型 ， 一定时间内 （ 30min ） 对荧光素钠溶液的渗漏 。 试 验以不加细胞的嵌入型细胞培养皿 （ transwell ）对荧光素钠溶液的渗漏作为最大荧光素渗漏 ； 以阴性对照组 MDCK 细胞模型对荧光素钠溶液的渗漏作为最小渗漏（ 0% 渗漏）。 以受试物引起 20% 荧光素钠溶液渗漏时的浓度 FL 20（ mg/ mL ）作为判定受试物眼刺激 / 腐蚀性的标准。 4 试验原理 以在嵌入型细胞培养皿 （ transwell ） 内单层培养的致密犬肾细胞 （ MDCK ） 来模拟眼角 膜上皮细胞的屏障结构，通过检测暴露于受试物后的 MDCK 细胞模型对荧光素钠的渗漏率 ， 来判断 MDCK 细胞模型的屏障破坏程度，进而预测和评估受试物的眼刺激 /腐蚀性。 5 试验方法 5.1 试验材料与试剂 5.1.1 细胞株 采用犬肾细胞 MDCK ，该细胞为贴壁生长。要求：来源清晰，代数明确（ <30 代）。 5.1.2 培养基