附件 9 体外皮肤变态反应 人细胞系活化试验 In Vitro Skin Sensitisation ： Human Cell Line Activation Test （ h-CLAT ） 1 范围 本方法规定了体外皮肤变态反应：人细胞系活化试验的基本原则、要求和方法。 本方法适用于可溶或者能形成稳定分散体系的化妆品用化学原料安全性毒理学检测。 2 试验目的 预测和评价化妆品用化学原料是否具有潜在皮肤致敏性。 3 定义 3.1 细胞 75% 存活率浓度值 75% cell viability 用受试物染毒后，细胞存活率为 75% 时对应的受试物浓度值。 3.2 荧光强度均值 Mean Fluorescence Intensity 用流式细胞仪测定的荧光强度几何平均数。 3.3 相对荧光强度值 Relative Fluorescence Intensity 扣除同型对照后， 100 倍的受试物 MFI 和溶剂对照 MFI 的比值。 3.4 CD86 有效作用浓度值 Effective Concentration 150 CD86 的相对荧光强度值达到 150 时对应的受试物浓度值。 3.5 CD54 有效作用浓度值 Effective Concentration 200 CD54 的相对荧光强度值达到 200 时对应的受试物浓度值。 4 试验原理 当致敏物接触皮肤后 ，树突状细胞在移动到淋巴器官的过程中分化成熟 ，并上调一系列 表面分子的表达 。体外培养类树突状细胞人急性单核白血病细胞 ，并和受试物共暴露 24h 后 ， 使用荧光抗体染料对细胞表面分子 CD86 、CD54 染色并用流式细胞仪测定 ，从而判定待测物 是否具有致敏性。 5 试验方法 5.1 试验材料与试剂 5.1.1 细胞 选用人急性单核白血病细胞 （ The human monocytic leukaemia cell line ，THP-1 ）。要求 ： 来源清晰 ，代数明确 （ <30 代 ）。细胞使用前应进行稳定性检测 ，通过稳定性检测后可用于 本试验。