体外皮肤变态反应:人细胞系活化试验Human Cell Line Activation Test （征求意见稿） 1 范围 本方法规定了体外皮肤变态反应：人细胞系活化试验的基本原则、要求和方法。 本方法适用于化妆品用化学原料潜在致敏性的评价。 2 试验目的 本试验用于检测体外培养的人急性单核白血病细胞表面标记物CD86 、CD54 的表达，以 评价受试物引起皮肤变态反应的可能性。 3 定义 3.1 细胞75%存活率浓度值 75% cell viability 用受试物染毒后，细胞存活率为 75%时对应的受试物浓度值 3.2 荧光强度均值 Mean Fluorescence Intensity 用流式细胞仪测定的荧光强度几何平均数 3.3 相对荧光强度值 Relative Fluorescence Intensity 扣除同型对照后， 100倍的受试物 MFI和溶剂对照 MFI的比值 3.4 CD86 有效作用浓度值 Effective Concentration 150 CD86 的相对荧光强度值达到 150时对应的受试物浓度值 3.5 CD54 有效作用浓度值 Effective Concentration 200 CD54 的相对荧光强度值达到 200时对应的受试物浓度值 4 试验的基本原则 当致敏物接触皮肤后，树突状细胞在移动到淋巴器官的过程中分化成熟，并上调一系列 表面分子的表达。体外培养类树突状细胞：人急性单核白血病细胞，并和受试物共暴露 24h 后，使用荧光抗体染料对细胞表面分子CD86 、CD54 染色并用流式细胞仪测定，从而判定待 测物是否具有致敏性。 5 试剂 5.1 细胞 选用人急性单核白血病细胞（The human monocytic leukaemia cell line ，THP-1 ）。细胞 使用前应进行稳定性检测。推荐使用 ATCC的TIB-202 TM 细胞株。 5.2 培养基