1 体外皮肤变态反应 U937 细胞激活试验 U937 cell line activation Test （征求意见稿） 1 范围 本方法规定了体外皮肤变态反应 U937 细胞激活试验的基本原则、要求和方法。 本方法适用于化妆品用化学原料潜在致敏性的评价。 2 试验目的 本试验用于检测体外培养的人组织细胞淋巴瘤细胞表面标记物 CD86 的表达，以评价受 试物引起皮肤变态反应的可能性。 3 定义 3.1 70% 细胞存活率浓度值 70% cell viability （ CV70 ） 受试物染毒后，细胞存活率为 70% 时对应的受试物浓度值。 3.2 刺激指数 stimulation index （ S.I. ） 与溶剂对照相比，扣除同型对照后流式细胞仪测定的受试物阳性细胞相对强度值。 3.3 CD86 有效作用浓度值 Effective Concentration 150 （ EC150 ） CD86 的相对荧光强度值达到 150 时对应的受试物浓度值。 4 试验的基本原则 当致敏物质接触皮肤后 ，树突状细胞在移动到淋巴器官的过程中分化成熟 ，并上调一系 列表面分子的表达 。体外培养类树突状细胞 ：人组织细胞淋巴瘤细胞 ，并和受试物共暴露 48h 后，使用荧光抗体染料对细胞表面分子 CD86 染色并用流式细胞仪测定，从而评价受试物是 否具有致敏性。 5 试剂 5.1 细胞 选用人组织细胞淋巴瘤细胞（ The human histiocytic lymphoma cell line ， U937 细胞）。 细胞使用前应进行稳定性检测。推荐使用 clone CRL1593.2 细胞株。 5.2 培养基 RPMI 1640 基础培养液中加入 10% 胎牛血清、适量抗生素，配制成 1640 完全培养基。 5.3 染色缓冲液 磷酸盐缓冲液中加入 5% 的胎牛血清。 5.4 染料和抗体类物质 7-氨基放线素菌 -D 染料（ 7-AAD ）